НОВИНКА! Упрощенное производство лентивирусов псевдотипа SARS-CoV-2 от Takara BIO
Уважаемые коллеги,
компания Takara BIO разработала новую группу очень актуальных на сегодня наборов для продукции лентивирусных частиц с SARS-CoV-2.
Общая цель разработки методов лечения COVID-19 - подавить инфекцию SARS-CoV-2. Учитывая меры безопасности, необходимые при обращении с живым вирусом SARS-CoV-2, исследователи часто используют альтернативные вирусы, псевдотипы гликопротеина-S (spike) SARS-CoV-2 (Ni et al. 2020, Shang et al. 2020). Компания Takara BIO адаптировала свою упаковочную систему Lenti-X, чтобы обеспечить получение псевдотипированных лентивирусных частиц с высоким титром в удобном формате.
смеси для трансфекции для получения лентивирусных частиц, не содержащих белок оболочки (обычно используемый в качестве отрицательного контроля).
Высокие титры псевдовируса SARS-CoV-2 получают простым одноэтапным методом: необходимо просто добавить воду, содержащую выбранный вами вектор переноса, в пробирку с реагентами, а затем нанести восстановленную смесь для трансфекции к культуре упаковывающих клеток (например, Lenti-X 293T ) в 10-сантиметровую чашку. Вирусные супернатанты можно собирать через 48–72 часа после трансфекции.
Доступны системы упаковки для производства вирусных частиц, содержащих на ваш выбор четыре различных варианта гликопротеина-S SARS-CoV-2:
WT (полноразмерный) - полученный из изолята Wuhan-Hu-1 (NC_045512.2) нового коронавируса SARS-CoV-2, кодон-оптимизированный для экспрессии в клетках млекопитающих (№ 632668, 632672).
D614G (полноразмерный) - включает мутацию D614G в последовательности, кодирующей гликопротеин-S. Распространенность этой мутации быстро выросла с начала пандемии COVID-19 (Isabel et al.2020) (№632669, 632673).
WT (укороченный) (№632670, 632674) и D614G (укороченный) (№632671, 632675) — укорочение WT и D614G- кодирующих последовательностей гликопротеина-S за счет удаления 19 аминокислот с С-концов. Элиминация данных аминокислотных последовательностей приводит к повышенному содержанию гликопротеина-S на полученных частицах, и в результате, к повышенной инфекционности частиц (Johnson et al. 2020).