Контроль распространения COVID-19 с помощью быстрого и прямого анализа слюны
Ранняя диагностика коронавируса и эффективная профилактика являются основными задачами в борьбе с эпидемией COVID-19. Золотой стандарт диагностики SARS-CoV-2 — ПЦР-диагностика мазка с задней стенки носоглотки. Однако мазок из носоглотки – относительно инвазивная процедура, вызывающая кашель и в некоторых случаях кровотечение, что увеличивает риск инфицирования медицинского персонала.
Ограниченное число наборов для диагностики SARS-CoV-2, трудоемкость пробоподготовки, и соответственно, увеличенное время анализа, по-прежнему затрудняют проведение популяционных скрининговых исследований, необходимых для сдерживания пандемии COVID-19. Поиск чувствительного, быстрого, легкого и недорогого теста является ключом к контролю над распространением вируса.
Тесты слюны сравнимы по чувствительности с мазками из носоглотки для выявления SARS-CoV-2 и более удобны для широкого применения (Wyllie et al.2020). Сбор образцов неинвазивен, его можно надежно провести дома, не подвергая опасности медицинских специалистов. Отсутствует необходимость для проведения теста иметь значительный запас тампонов, ватных палочек и специализированных пробирок для забора крови. Анализ слюны наиболее эффективен во время инфекционной фазы болезни, которая длится 1–3 дня до и примерно 7 дней после появления симптомов. Напротив, мазок из носоглотки является наиболее надежным после появления у пациента симптомов (Wyllie et al.2020; Ott et al.2020).
Специалисты компании Takara BIO адаптировали и оптимизировали технологию PrimeScript III, в результате чего была получена смесь Direct One-Step RT-qPCR для быстрого, точного и безэкстракционного обнаружении SARS-CoV-2 в слюне.
Простой рабочий протокол включает следующие этапы работ:
смешать образец слюны и реагент для предварительной обработки и выполнить термообработку;
объединить аликвоту этой смеси с мастер-миксом RT-qPCR и выполнить RT-qPCR.
Весь рабочий процесс от предварительной обработки до обнаружения занимает менее одного часа (~ 5 минут для предварительной обработки и ~ 50 минут для RT-qPCR в реальном времени), что позволяет быстро получить результаты. Этот надежный метод имеет высокую чувствительность для обнаружения низкого числа копий генома SARS-CoV-2 (всего 10 копий РНК SARS-CoV-2).
Литература:
Blacksell, S. D. Commercial dengue rapid diagnostic tests for point-of-care application: recent evaluations and future needs. J. Biomed and Biotechnol, 12, Article ID 151967 (2012).
Ott, I. M., et al. Simply saliva: stability of SARS-CoV-2 detection negates the need for expensive collection devices. MedRXiv. doi: 10.1101/2020.08.03.20165233 (2020).
Ranoa, D. R. E. et al. Saliva-Based Molecular Testing for SARS-CoV-2 that Bypasses RNA Extraction. BioRxiv. Doi: 10.1101/2020.06.18.159434 (2020).
Wu, G. and Zaman, M. H. Low-cost tools for diagnosing and monitoring HIV infection in low resource settings, Bulletin of the World Health Organization, 90, 914920 (2012).
Wyllie, A. L. et al. Saliva is more sensitive for SARS-CoV-2 detection in COVID-19 patients than nasopharyngeal swabs. MedRxiv. doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.16.20067835 (2020).
Ранняя диагностика коронавируса и эффективная профилактика являются основными задачами в борьбе с эпидемией COVID-19. Золотой стандарт диагностики SARS-CoV-2 — ПЦР-диагностика мазка с задней стенки носоглотки. Однако мазок из носоглотки – относительно инвазивная процедура, вызывающая кашель и в некоторых случаях кровотечение, что увеличивает риск инфицирования медицинского персонала. 