Набор для скрининга Guide-it™ Knockin Screening Kit обеспечивает высокочувствительное обнаружение событий успешной гомологичной рекомбинации (HR) в смешанных или клональных популяциях клеток, редактируемых с использованием таких технологий, как система CRISPR/Cas9.

В наборе используется простой метод, основанный на флуоресценции, который обнаруживает успешные события HR независимо от длины нокаута (от однонуклеотидных замен до более длинных вставок) или последовательности геномной области, окружающей редактирование. Простой и быстрый рабочий процесс набора состоит из ПЦР-амплификации геномного целевого сайта с последующим ферментативным анализом с зеленой и красной флуоресцентной индикацией. В ферментативном анализе используется стандартный флуоресцентный планшет-ридер или прибор для количественной ПЦР для определения конечной точки флуоресценции. Никаких дополнительных специальных инструментов не требуется.

Полный рабочий процесс занимает приблизительно четыре часа, при этом, обнаружение флуоресцентного сигнала положительно коррелирует с присутствием желаемой последовательности в сайте нужной области генома. 

Для исследовательских приложений, которые включают разработку SNPs, можно использовать этот анализ для идентификации гетерозиготных клонов, несущих по одной копии каждого из двух различных аллелей (например, аллелей SNP и WT). Для сценариев, включающих выбивание более длинных последовательностей, анализ позволяет одновременное обнаружение бесшовных вставок как на 5', так и на 3' концах встроенной последовательности. 

Онлайн-инструмент для упрощенного проектирования олигонуклеотидов для конкретных анализов

Разработка SNP с помощью набора для скрининга Guide-it Knockin

Часто задаваемые вопросы о гомологической репарации

Производитель Takara BIO