Дрожжевая двухгибридная система – метод, позволяющий не только исследовать взаимодействие пары известных белков, но и искать новые взаимодействующие белки in vivo, используя дрожжевую клетку, как живую пробирку.
Matchmaker® Gold Yeast Two-Hybrid System — это полная двухгибридная система на основе GAL4, предназначенная для обнаружения взаимодействий с белками. S. cerevisiae штамм Y2HGold (Clontech) способствует устранению многих ложноположительных результатов, возникающих при скрининге библиотеки слитых генов активационного домена (AD), поскольку он содержит четыре отдельных репортерных гена, которые можно использовать для анализа белковых взаимодействий. Система также характеризуется низким фоном из-за маркера устойчивости к Aureobasidin А.
Принцип двухгибридной дрожжевой системы. В классическом варианте двухгибридной дрожжевой системы, белок-"наживка" (bait protein) представляет собой химерный белок (fusion protein), состоящий из целевого белка Х и ДНК-связывающего домена (DNA-binding domain, DBD) фактора транскрипции (DBDX). Белок-"добыча" (prey protein) также является белком слияния, состоящим из белка Y и активационного домена (activation domain, AD) того же фактора транскрипции (AD-Y). Оба белка совместно коэкспрессируются в дрожжевых клетках. Белок DBD-X связывается с сайтом оператора в промоторной области, но не активирует транскрипцию гена-репортера из-за отсутствия AD домена. В случае взаимодействия белков X и Y происходит формирование из доменов DBD и AD функционально активного фактора транскрипции, что приводит к включению транскрипции гена-репортера, в качестве которого обычно используется ген lacZ, кодирующий бактериальную β-галактозидазу. Активность lacZ может быть легко определена с помощью колориметрии.
Состав набора:
Коробка 1:
- 50 µl pGBKT7 DNA-BD Cloning Vector (0.1 µg/µl)
- 50 µl pGADT7 AD Cloning Vector (0.1 µg/µl)
- 50 µl pGBKT7-53 Control Vector (0.1 µg/µl)
- 50 µl pGADT7-T Control Vector (0.1 µg/µl)
- 50 µl pGBKT7-Lam Control Vector (0.1 µg/µl)
Коробка 2:
- 0.5 ml S. cerevisiae Y2HGold
- 0.5 ml S. cerevisiae Y187
Коробка 3:
- 1 pouch YPDA Broth
- 1 pouch YPDA with Agar
- 1 pouch SD/-Leu with Agar
- 1 pouch SD/-Trp with Agar
Коробка 4:
Yeastmaker™ Yeast Transformation System 2:
- - 2 x 1 ml Yeastmaker Carrier DNA, denatured (10 mg/ml)
- - 20 µl pGBT9 (0.1 µg/µl; control plasmid)
Коробка 5:
Yeastmaker Yeast Transformation System 2:
- - 2 x 50 ml 50% PEG
- - 50 ml 1 M LiAc (10X)
- - 50 ml 10X TE Buffer
- - 50 ml YPD Plus Liquid Medium
Условия хранения:
- Коробки 1 и 4 при –20°C.
- Коробка 2 при –70°C.
- Коробки 3 и 5 при комнатной температуре.
Фасовка: 1 система
Производитель: Takara BIO
630489 Двухгибридная система дрожжей Matchmaker® Gold Yeast Two-Hybrid System, 1 система, Takara BIO
- Производитель: Takara BIO
- Модель: 630489
- Наличие: Pre-Order