РеагентTrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher это 20-кратныйрастворвдиметилформамиде, предназначенныйдлятушенияавтофлуоресценциилипофусцинаприиммунофлуоресцентномокрашиваниисрезовтканей. Этот реагент также снижает
автофлуоресценцию другого генеза, в том числе и внеклеточного матрикса
Липофусцин
состоит из ярко автофлуоресцирующих гранул окисленных белков и липидов,
собирающихся в лизосомах стареющих клеток. Липофусцин флуоресцирует ярко при
всех длинах волн, применяемых в флуоресцентной микроскопии. Следовательно,
детекция специфического сигнала в тканях взрослых людей или животных может быть
невозможна до проведения специальных мероприятий по маскировке
автофлуоресценции.
Традиционно
для тушения сигнала от липофусцина применяется Sudan Black B, в растворе
которого срезы инкубируются после иммунофлуоресцентного окрашивания. Однако,
кроме маскировки сигнала от липофусцина, Sudan Black B вызывает однородную
неспецифическую фоновую флуоресценцию в красной области спектра, что
ограничивает использование красителей из этой области.
Компания
Biotium разработала краситель TrueBlack в качестве превосходной альтернативы
для Sudan Black B. TrueBlack отлично тушит автофлуоресценцию липофусцина,
продуцируя намного меньше фоновой флуоресценции в красных областях спектра.
ОбработкаTrueBlack может проводиться как до, так и после иммунофлуоресцентного
окрашивания срезов, методика простая, быстрая и оказывает минимальный эффект на
сигнал флуоресцирующих антител или ядерных красителей
Автофлуоресценция липофусцина в ткани мозга взрослого человека, фиксированной метанолом. В необработанной ткани (верхняя строка) липофусцин представлеен в виде флуоресцирующих гранул при всех длинах волн. Sudan Black B (средняя строка) маскирует автофлуоресценцию липофусцина, но продуцирует фоновое свечение в красных областях спектра. TrueBlack (нижняя строка) маскирует липофусцин с минимальным увеличением фоновой флуоресценции. Криосрезы такани головного мозга взрослого человека, фиксированные метанолом, были необработаны, обрабатывались раствором 0,1% Sudan Black B в 70% этаноле или 1Х TrueBlack согласно протоколу. Образцы фотографировали с использованием конфокального микроскопа Zeiss LSM 700 в областях флуоресценции ФИТЦ (зеленой), Cy3 (красной) и Cy5 (дальней красной). Фото взято с сайта компании Biotium.